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[walsen]

Pero yo sabía que no era eso lo que no me dejaba dormir. Ni el enfado de Silvia, aunque tomé nota mentalmente de que la próxima vez habría de ser más disimulado con mis miradas a sus amigas. Lo que no me dejaba dormir era aquel fino triangulito violeta que había visto sobre el pubis de Silvia. Esa tanga parecía la puerta al paraíso. Y lo peor es que yo sabía que lo tenía a escasos centímetros de mi mano derecha.

Harto ya de imaginarme

[Sunburn]

La Dirección General de Cooperación y Comunicación Cultural contribuye al favorecimiento de la comunicación cultural entre las Comunidades Autónomas, a mejorar la proyección de la cultura española en el extranjero y, en general, a la promoción de la cultura en todos aquellos ámbitos que no son una función específica de otras Direcciones Generales de la Secretaría de Estado de Cultura.

Algunas de sus funciones son:

Mantener la Agenda Cultural en Internet.
Organizar y desarrollar programas culturales en el extranjero.
Participar en la preparación de Tratados, Convenios y programas de cooperación, tanto a nivel nacional como internacional, con instituciones, entidades y personas públicas o privadas.
Organizar encuentros, seminarios, publicaciones, etc. destinados al fomento del voluntariado y del turismo cultural y a propiciar la implicación de la sociedad en la cultura.
Gestionar los programas de becas de formación y ayudas de la Secretaría de Estado de Cultura.
Cooperar con la acción cultural de las Comunidades Autónomas, propiciando, de acuerdo con ellas, la comunicación cultural entre las mismas, el conocimiento de la pluralidad y riqueza de sus respectivos Patrimonios Culturales, así como el intercambio de información sobre sus actividades culturales.
Canalizar la información sobre las convocatorias de ayudas del "Programa 2000" de la Unión Europea, difundiendo información y prestando asesoramiento a los profesionales, operadores y agentes culturales.

[aragorn_ara]

ye he visto el ultimo mensaje y pense que iba a venir dead y nos iba a colgar los huevos por un post de offtopic de 33 paginas.......

[Sunburn]

La Dirección General de Cooperación y Comunicación Cultural contribuye al favorecimiento de la comunicación cultural entre las Comunidades Autónomas, a mejorar la proyección de la cultura española en el extranjero y, en general, a la promoción de la cultura en todos aquellos ámbitos que no son una función específica de otras Direcciones Generales de la Secretaría de Estado de Cultura.

Algunas de sus funciones son:

Mantener la Agenda Cultural en Internet.
Organizar y desarrollar programas culturales en el extranjero.
Participar en la preparación de Tratados, Convenios y programas de cooperación, tanto a nivel nacional como internacional, con instituciones, entidades y personas públicas o privadas.
Organizar encuentros, seminarios, publicaciones, etc. destinados al fomento del voluntariado y del turismo cultural y a propiciar la implicación de la sociedad en la cultura.
Gestionar los programas de becas de formación y ayudas de la Secretaría de Estado de Cultura.
Cooperar con la acción cultural de las Comunidades Autónomas, propiciando, de acuerdo con ellas, la comunicación cultural entre las mismas, el conocimiento de la pluralidad y riqueza de sus respectivos Patrimonios Culturales, así como el intercambio de información sobre sus actividades culturales.
Canalizar la información sobre las convocatorias de ayudas del "Programa 2000" de la Unión Europea, difundiendo información y prestando asesoramiento a los profesionales, operadores y agentes culturales.

[LeonR16]

Unas lyrics de Travis
Writing To Reach You
Every day I wake up and it's Sunday
Whatever's in my head won't go away
The radio is playing all the usual
And what's a wonderwall anyway
Because my inside is outside
My right side's on the left side
'Cos I'm writing to reach you
But I might never reach you
I long to teach you about you
But that's not you
It's good to know that you are home for Christmas
It's good to know that you are doing well
It's good to know that you all know I'm hurting
It's good to know I'm feeling not so well
Because my inside is outside
My right side's on the left side
'Cos I'm writing to reach you
But I might never reach you
I long to teach you about you
But that's not you
Do you know it's true
And that won't do
Maybe then tomorrow will be Monday
And whatever's in my head should go away
Still the radio keeps playing all the usual
And what's a wonderwall anyway
Because my inside is outside
My right side's on the left side
'Cos I'm writing to reach you
But I might never reach you
I long to teach you about you
But that's not you
Do you know it's true
And that won't do
You know it's you
I'm talking to
The Fear
All I wanted was the chance to say
I would like to see you in the morning
Rolling over to have you there
Would make it easy for a little bit longer
But here
Closer every year
So near
The fear is coming clear
My dear
The fear is here
Hottest summer in a hundred years
But summer didn't bother
Getting up this morning
And so all the trees forgot to wake
They were dropping all their leaves
On the ground below them
But here
Closer every year
So near
The fear is coming clear
My dear
The fear is here
All I wanted was the chance to say
I would like to see you in the morning
Rolling over just to have you there
Would make it easy for a little bit longer
Make it easy for a little bit longer
Make it easy for a little bit longer
Make it easy for a little bit longer
Make it easy for a little bit longer
Make it easy for a little bit longer
As You Are
Everyday I wake up alone
I'm not like all the other boys
And ever since I was young
I had no choice
But it's OK to lead me on
I admit it's not much fun
To be led on by such a one
As you are
As you are
As you are
And ever since I woke up I felt the net
Was lifting me out of the sea
And even when I'm sinking I feel the need
But it's OK to lead me on
I must admit it's not much fun
To be alone with such a one
As you are
As you are
As you are
And ever since a long time
I felt the rain
And there was no danger
And no more strangers
As you are




Driftwood
Everything is open
Nothing is set in stone
Rivers turn to oceans
Oceans tide you home
Home is where the heart is
But your heart had to roam
Drifting over bridges
Never to return
Watching bridges burn
Found on:

The Man Who
You're driftwood floating underwater
Breaking into pieces, pieces, pieces
Just driftwood, hollow and of no use
Waterfalls will find you, bind you, grind you

Nobody is an island
Everyone had to go
Pillars turn to butter
Butterflying low
Low is where your heart is
But your heart has to grow
Drifting under bridges
Never with the flow

And you really didn't think it would happen
But it really is the end of the line
So I'm sorry that you've turned to driftwood
But you've been drifting for a long, long time

Everywhere there's trouble
Nowhere's safe to go
Pushes turn to shovels
Shovelling the snow
Frozen you have chosen
The path you wish to go
Drifting now forever
And forever more
Until you reach your shore

You're driftwood floating underwater
Breaking into pieces, pieces, pieces
Just driftwood, hollow and of no use
Waterfalls will find you, bind you, grind you
And you really didn't think it would happen
But it really is the end of the line
So I'm sorry that you've turned to driftwood
But you've been drifting for a long, long time
You've been drifting, for a long, long
Drifting for a long, long time



The Last Laugh Of the Laughter
When the laughter fades away
Ma vie
Tout ma vie
When there's nothing left to say
Ma vie
My oh my
Found on:

The Man Who
It's the last laugh of the laughter
Sur la dernier page du chapitre
On the last day of the year
Ma vie
Tout ma vie

When the spotlight fades away
Ma vie
C'est la vie
When the blue skies turn to grey
Ma vie
Tout ma vie

It's the last laugh of the laughter
Sur la dernier page du chapitre
On the last day of the year
Ma vie
Tout ma vie

When the laughter fades away
Ma vie
Tout ma vie
When there's nothing more to say
Ma vie
My oh my

It's the last laugh of the laughter
Sur la dernier page du chapitre
On the last day of the year
Ma vie
Tout ma vie
Ma vie
My oh my
Turn
I want to see what people saw
I want to feel like I felt before
I want to see the kingdom come
I want to feel forever young
I want to sing
To sing my song
I want to live in a world where I belong
I want to live
I will survive
Found on:


The Man Who
And I believe that it won't be very long
If we turn, turn, turn, turn, turn
Then we might learn
So where's the stars?
Up in the sky
And what's the moon?
A big balloon
We'll never know unless we grow
There's so much world outside the door
I want to sing
To sing my song
I want to live in a world where I'll be strong
I want to live
I will survive
And I believe that it won't be very long
If we turn, turn, turn, turn
And if we turn, turn, turn, turn
Then we might learn
Turn, turn, turn, turn
Turn, turn, turn
And if we turn, turn, turn, turn
Then we might learn
Learn to turn

Why Does It Always Rain On Me?
I can't sleep tonight
Everybody saying everything's alright
Still I can't close my eyes
I'm seeing a tunnel at the end of all these lights

Found on:

The Man Who
Sunny days
Where have you gone?
I get the strangest feeling you belong
Why does it always rain on me?
Is it because I lied when I was seventeen?
Why does it always rain on me?
Even when the sun is shining
I can't avoid the lightning

I can't stand myself
I'm being held up by an invisible man
Still life on a shelf when
I got my mind on something else

Sunny days
Where have you gone?
I get the strangest feeling you belong
Why does it always rain on me?
Is it because I lied when I was seventeen?
Why does it always rain on me?
Even when the sun is shining
I can't avoid the lightning


Oh, where did the blue skies go?
And why is it raining so?
It's so cold
I can't sleep tonight
Everybody's saying everything's all right
Still I can't close my eyes
I'm seeing a tunnel at the end of the lights

Sunny days
Where have you gone?
I get the strangest feeling you belong
Why does it always rain on me?
Is it because I lied when I was seventeen?
Even when the sun is shining
I can't avoid the lightning
Oh, where did the blue skies go?
And why is it raining so?
It's so cold
Why does it always rain on me?
Why does it always rain on....
Luv
What's so wrong?
Why the face so long
Is it over?
And where you going that
You no longer belong here?
And distance tells you that
Distance must come between love
Where have you been Luv?
When the mistake we made
Was in never having planned to fall in love, Luv
Found on:
The Man Who
Singing this song
Singing along
Makes it easier for me to see you go
But in doing so
I'm letting you go
It only serves to show me
That I'm still in love with you

Singing this song
Singing along
Makes it easier for me to see you go
But in doing so
In letting you go
It only serves to show me
That I'm still in love with you

So what's so wrong?
Why the face?
So long
Are you changing?
And where you been to that
You no longer remember?

And distance tells you that
Distance must come between love
Where have you been Luv?

It's just the chance we took
Having never planned to fall in love, Luv
Having never planned to fall in love, Luv
Having never planned to fall in love, Luv
Luv

She's So Strange
She's so strange
And she wore a black moustache
And pilfered all the petty cash
She went to Birmingham
She'll soon be in the can
Found on:

The Man Who
She's so cruel
And she knew what just what to do
And while the cats were all sniffing glue
They played their silly games
And now they'll take the blame

What she'd done
And she didn't know quite what she did
And they told her that she better had
So now she starts to cry
Without a reason why

She's so poor
And only now she's looking back
Sees her story on a paperback
What will become of her
There's not much left for her
Slide Show
Today is the day
For dancing and for singing
The birds in the trees and all
The bells are ringing
The sun is in the sky
Is bright as bright second light
Is bright oh god I hope I'm alright
Found on:

The Man Who
Cause I'm gonna cry
Hold on, hold on
Slow down, slow down
You're out of touch
Out of touch
'Cause there is no design for life
There's no devil's haircut in my mind
There is not a wonderwall to climb

To climb or step around
But there is a slide show and it's so slow
Flashing through my mind

Today was the day
But only for the first time
Hold on, hold on
Slow down, slow down
You're out of touch
Out of touch

'Cause there is no design for life
There is no devil's haircut in your mind
There is not a wonderwall
To climb or step around
But there is a slidesshow and it's so slow
Flashing through my mind

Today was the day
But only for the first time
I hope it's not the last time
Blue Flashing Light
Saturday evening
Saturday evening
A quarter to five
Oh we see him arrive at the door
Pushed you aside as he staggered inside
Spitting alcohol over the floor
A storm is abrew
And it's sure to fall soon
As I look at you from the shore
Found on:

The Man Who
So you'd better hold on
Cos it's Saturday night
And your friends are all out
And you feel like shit
Cos they never call you
No they never call you
No they never call, never call, never bloody ever ...

Call me a name and I'll hit you again
You're a slut, you're a bitch, you're a whore
Talk to your daddy in that tone of voice
There's a belt hanging over the door
So you run to your room and you hide in your room
Thinking how you can settle the score

But it's Saturday night and a quarter to six
And your friends are all out
But you live in the sticks
Still they never call you
No they never call you
No they never call, never call, never bloody ever call


Blue flashing light last Saturday night
Brought the neighbours all out on the street
Watched as the firemen carried you out
Then we stared at each other's feet
Now everyone sees and yet nobody says
Are we all just afraid of the heat?

But it's Saturday night and I'm lying alone
In the bed that I made, disconnected the phone
Still they never called you
No they never call you
No they never call, never call, never bloody ever call

[walsen]

Harto ya de imaginarme aquel trocito de tela abrí disimuladamente los ojos. Solo un poquito, para ver si se veía todavía, pensaba hipócritamente.
Y efectivamente se veía. Y mucho más que después de introducirla en el coche, ya que el casto arreglo que de sus ropas había hecho su novio había saltado por los aires en cuanto ella se había arrimado a mí.

[neojv]

lo de sun es la polla ya se repite y todo

[shoryu]

Ahora Sunburn esta peor jeje

[bregamutero]

va, no venga, voy a meter solo el trabajo de doctorado, aunque no se si las graficas las cojera:







UNIVERSIDAD DE LÉON
DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR









TRABAJO TUTELADO DEL CURSO DE DOCTORADO “BIOLOGÍA MOLECULAR Y BIOTECNOLOGÍA” BAJO LA DIRECCIÓN DEL DR. JOAQUÍN SOLER MOLINA: “Efecto de la presencia en el medio de diferentes ácidos monocarboxílicos sobre la degradación del glucógeno en Phycomyces blakesleeanus”





SERGIO DE CIMA MARTÍN
León; Curso 2000-2001


1. INTRODUCCIÓN

Phycomyces blakesleeanus es un hongo unicelular y plurinucleado, de alimentación heterótrofa y pared celular con un sistema de fibrillas donde la proporción de quitina es mayor que la de celulosa. Pertenece al grupo de hongos inferiores, clase Zygomycetes, orden Mucorales, familia Mucoraceae y género Phycomyces, caracterizado por el enorme tamaño del esporangióforo
Sandman y Hilgenberg (1980) comprobaron que el 75% de la glucosa tomada del medio se oxida para obtener energía, lo que implica que sólo el 25% del carbono aportado por la glucosa se convierte en constituyentes celulares. Phycomyces, al ser un hongo aerobio estricto, depende de la presencia de oxígeno para su desarrollo y posee el ciclo de los ácidos tricarboxílicos (Gangloff, 1966). La presencia de la ruta del glioxilato en P. blakesleeanus se confirmó al comprobar que era capaz de crecer en ácido oleico como única fuente de carbono (Botz, 1985), el cual era degradado a acetil-CoA y metabolizado a través de la ruta del glioxilato. Ésta, sin embargo, no es funcional bajo condiciones normales de cultivo en glucosa (Sandmann, 1977).
P. blakesleeanus puede sintetizar y degradar los carbohidratos trehalosa y glucógeno en distintos estadios de su ciclo de vida. Así, mientras que el disacárido trehalosa se encuentra en esporas y constituye hasta el 35 % de su peso (Rudolph and Ochsen, 1969; Val Laere et al., 1987), el polisacárido glucógeno se ha detectado en micelios (Tu y Malhotra, 1977) y esporangioforos en estadio I (Galland y Ootaki, 1987). Se ha descrito que la trehalosa sirve para el mantenimiento de la arquitectura celular en esporas latentes (Van Laere et al., 1987), mientras que la función del glucógeno en micelios, no es del todo conocida. En un trabajo previo, en nuestro laboratorio (Rúa et al., 1993) se midió la acumulación y movilización de glucógeno en micelio de P. blakesleeanus NRRL 1555 (-) sometido a distintas condiciones nutricionales y ambientales. En cultivos en medios mínimos con glucosa, xilosa, sacarosa, fructosa y maltosa, el glucógeno representó hasta un 4 % del peso seco del micelio. Los valores máximos fueron observados durante la fase de crecimiento exponencial, con independencia de la fuente de carbono usada. El glucógeno se acumuló también en cultivos desprovistos específicamente de las fuentes de nitrógeno o fósforo en presencia de glucosa. Hemos detectado que la movilización de glucógeno se produce en condiciones de estrés nutricionales y físicas.
En este experimento tratamos de poner de manifiesto que algunos sustratos gluconeogénicos como acetato, piruvato, y lactato permiten la acumulación de glucógeno (datos de nuestro laboratorio), pero además los tres primeros pueden actuar como agentes causantes de señales que conducen a la movilización del glucógeno acumulado durante el crecimiento en glucosa.


2. MATERIALES Y MÉTODOS.

2.1. Material biológico.

Para la realización del presente estudio se han utilizado la estirpe silvestre NRRL 1555 (-)de Phycomyces blakesleeanus, incluido en el género Phycomyces, familia Mucoraceae, orden Mucorales, clase Zygomycetes (Cerdá-Olmedo y Lipson, 1987). Dicha cepa fue obtenida de la colección del Prof. A. P. Eslava.

2.2. Medios de cultivo de Phycomyces blakesleeanus.

2.2.1. Cultivo en medio sólido.

Para el cultivo en medio sólido se utilizó el medio mínimo S IV (Sutter, 1975), consistente en 20 g de D-glucosa (2% p/v), 2 g de L-asparagina·H2O y 20 ml de una solución concentrada, por cada litro de medio de cultivo. Este medio fue suplementado con 1 g de extracto de levadura, 1 g de Bactocasitone, y 15 g de agar por cada litro. La esterilización del medio se realizó en 1 atmósfera de presión (121 ºC) durante 20 min. El medio se repartió en placas de Petri de 90 mm de diámetro.

Un litro de la solución concentrada contiene 250 g de KH2PO4, 25 g de MgSO4·7H2O, 100 mg de tiamina-HCl, 10 mg de ácido cítrico monohidratado, 7,5 mg de Fe(NO3)3·9H2O, 0,5 mg de ZnSO4·7H2O, 0,25 mg de CuSO4·5H2O, 1,5 mg de MnSO4·H2O, 0,25 mg de NaMoO4·2H2O, 10 ml de CaCl2 al 14 % (p/v) y 2-3 ml de cloroformo.

2.2.2. Cultivo en medio líquido.

P. blakesleeanus fue cultivado en medio líquido utilizando el medio mínimo de composición definida S IV anteriormente descrito. Este medio se repartió en matraces de 250 ml a razón de 100 ml de medio por matraz, esterilizándose entonces de la forma indicada en el apartado anterior.

2.3. Obtención de esporas de Phycomyces blakesleeanus.

Una alícuota de esporas liofilizadas de Phycomyces blakesleeanus se incubaron en suspensión durante 15 min. a 48ºC para su activación, y se inocularon en placas de Petri de 90 mm de diámetro que contenían medio sólido, a razón de 1·104 esporas por placa. Se dejaron crecer durante 4 a 6 días a temperatura ambiente y con luz constante, tras los cuales se recogieron las esporas por rotura de la pared externa del esporangio al ponerla en contacto con agua (Ingold, 1940). Para ello las placas se colocaron invertidas en una campana de flujo laminar y se añadieron, a cada una, 2 ml de agua destilada estéril. Se giraron las tapas para conseguir la liberación de las esporas y éstas fueron recogidas con ayuda de una pipeta.
La suspensión de esporas se obtenida se centrifugó a 4.000 r.p.m. durante 5 min. y posteriormente se decantó. Las esporas se lavaron entonces, siempre en condiciones de esterilidad, dos veces con NaCl al 0,9 %, y 3 veces más con agua. Una vez obtenidas, se almacenaron en suspensión de agua estéril a 4ºC hasta su utilización, dentro de un tiempo máximo de diez días. En los casos en que fue necesario conservar las esporas durante más tiempo (varios meses) se liofilizaron y se almacenaron a -20ºC.

2.4. Obtención de micelio.

Las esporas activadas por calor se añadieron a matraces Erlenmeyer de 250 ml –que contenían 100 ml de medio mínimo líquido- el volumen adecuado de la suspensión de esporas activadas para tener 1·108 esporas por matraz. Los cultivos se incubaron en un incubador con agitación orbital RT-TK (Infors HT), a 22ºC y 200 r.p.m., en condiciones de oscuridad.
Estos cultivos fueron recogidos a distintas horas de crecimiento según el proceso de estudio a seguir separando el micelio del medio de cultivo por filtración en un kitasato mediante una bomba de vacío. El micelio así obtenido fue homogeneizado directamente o conservado a –80 ºC.

2.5. Transferencia de micelio a otro medio de cultivo.

El micelio recogido de la forma indicada en el apartado anterior fue lavado y transferido, en condiciones de esterilidad, a nuevos medios de cultivos estériles y resuspendido e incubado en las mismas condiciones

2.6. Determinación del grado de crecimiento.

El crecimiento de P. blakesleeanus se determinó por el peso seco del micelio. Para ello, una vez recogido el micelio, se midió el peso húmedo y a continuación se separo una alícuota que se mantuvo entre 60 y 80 ºC hasta la obtención de un peso constante. El valor obtenido se extrapoló para el total de la masa miceliar obtenida por cada matraz.

Obtención de extracto enzimático

Al micelio recogido por filtración se le añadió ácido perclórico en proporción 1:5 p/v (5 ml de ácido por 1 g de micelio) con lo que se consigue la desnaturalización de todas las proteínas cuando se produzca la rotura del micelio debido a la gran acidez del medio. Se procedió posteriormente a la homogeneización del micelio en un homogeneizador Braun MSK en frascos de 50 ml, utilizando perlas de vidrio de 0,45-0,50 mm de diámetro, durante 2 ciclos de 45 s, refrigerando con nieve carbónica.
Los extractos homogeneizados se centrifugaron a 20.000 g durante 20 min. a 4ºC en una centrífuga Beckman J2-21 M. Se recogió el sobrenadante que fue filtrado con lana de vidrio para eliminar posibles impurezas. Es muy importante medir el volumen exacto de extracto obtenido.

Desproteinización del extracto

Tras la desproteinización del extracto se procede a su neutralización para evitar la inestabilidad de los metabolitos. Este proceso se lleva a cabo mediante KOH concentrado, de manera que se alcance un pH de valor alrededor de 7 alterando en lo menos posible el volumen final de extracto. Se deja decantar el extracto neutralizado y se recoge el sobrenadante.

Determinación de glucógeno

La determinación del glucógeno se divide en dos partes consistentes en la rotura del glucógeno en sus unidades de glucosa por medio del amiloglucosidasa, y en el análisis de la glucosa-6-P obtenida mediante la glucosa oxidasa-peroxidasa

La mezcla de reacción para la rotura del polímero de glucógeno en sus constituyentes de glucosa consta 2 ml de tampón acetato / acético 0,2 M pH 4,8, 50 ml de amiloglucosidasa (10 mg/ml) y 0,5 ml de la muestra problema diluida si es necesario. Esta mezcla se incuba en un baño a 40 ºC durante 2 horas con agitación leve. Tras este tiempo la reacción se detiene mediante la adicción de 0,5 ml de HClO4 0.6N. La cantidad de glucosa desprendida en este proceso se determinara en la segunda etapa por la reacción de la glucosa oxidasa-peroxidasa.
El método de determinación de glucosa por la glucosa oxidasa-peroxidasa se basa en la estimación colorimétrica de la cantidad de o-dianisidina formada durante 20 minutos siguiendo la reacción indicada:
La cantidad de colorante formado (o-dianisidinaoxidada) es proporcional a la cantidad de glucosa añadida al medio de reacción, la cual es calculada refiriéndola a una recta patrón previamente elaborada.
La mezcla de reacción consta de 2 ml de tampón fosfato sódico 0,1 M pH 7 conteniendo 1,5 U/ml de peroxidasa y 9 U/ml de glucosa oxidasa, 0,1 ml de orto-dianisidina 25 mM disuelta en etanol al 45 %, 250 ml de agua y 250 ml de la muestra problema. Esta mezcla se incuba a 30 ºC durante 30 min., tras los cuales se añaden 2,5 ml de HCl 6 N para detener la reacción. El color desarrollado se leerá a 550nm y los resultados se comparan con una recta patrón de glucosa que varia entre 20 y 80 mg / ml.





3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

3.1. Efecto de diferentes ácidos monocarboxílicos sobre la degradación de glucógeno.

Cultivos de Phycomyces blakesleeanus de 24 horas en glucosa 2 % (p/v) que presentan los máximos contenidos de glucógeno fueron lavados y transferidos a medios mínimos con uno de los siguientes ácidos monocarboxílicos como fuente de carbono (Fig. 1): propionato (2,15 % p/v), piruvato (2,44 % p/v), butirato (1,87 % p/v), L-lactato (2,2 % p/v) y acetato (2,73 % p/v), todos ellos equivalentes en número de átomos de carbono a 2 % de glucosa.

Figura 1: Representación en escala logarítmica del porcentaje de glucógeno remanente tras la transferencia de cultivos de 24 horas en glucosa 2 % a medio mínimo con diferentes ácidos monocarboxílicos como fuente de carbono.
En la figura se aprecia que el mayor efecto en la degradación de glucógeno es debido al acetato y al piruvato,. ya que este carbohídrato desapareció a los 90 minuto de la transferencia, mientras que el butirato tuvo el menor efecto ya que a los 180 minutos aún permanecía el 21 % del contenido inicial. El micelio en propionato o lactato conservó a los 150 minutos de la transferencia un 5 % o un 10 % respectivamente del glucógeno inicial. En el medio control sin fuente de carbono se observó una perdida de tan solo el 25 % de glucógeno inicial durantes este tiempo de estudio del estrés (datos no mostrados)
En la figura 2 se aprecia que el pH del medio de cultivo apenas vario a lo largo del proceso. El pH inicial de estos medios esta comprendido entre 5,3 y 6,2, lo que indica unas condiciones suaves de acidez, por lo que el estrés se debe principalmente a la presencia de estos ácidos en el micelio.

Figura 2: Evolución del pH del medio de cultivo a lo largo del proceso para cada uno de los ácidos monocarboxílicos testados.

La perdida de peso seco durante el tiempo que duro el experimento se representa en la figura 3. Como puede apreciarse se observo un rápido descenso hasta unos niveles aproximados del 75-85 % durante la primera hora seguido de una estabilización en torno a esos valores durante el resto del experimento. En este caso también el acetato y el piruvato producen el mayor efecto en la disminución de peso seco.

Figura 3: Representación en escala logarítmica del % de peso seco con respecto al punto 0 obtenido a los diferentes tiempos del ensayo.




3.2. Efecto de la concentración del acetato sobre la degradación de glucógeno.

Experiencias previas realizadas en nuestro laboratorio pusieron de manifiesto que la cantidad de glucógeno almacenado por P. blakesleeanus es menor cuanto mayor es la proporción de acetato con respecto a glucosa que se añade al medio de cultivo como fuente de carbono.

Figura 4: Representación en escala linear del efecto de las diferentes concentraciones de acetato sobre la degradación de glucógeno.

En vista de los resultados obtenidos en el experimento anteriormente descrito determinamos cuantificar el efecto que tiene la concentración del ácido monocarboxílico sobre la movilización de glucógeno. Para ello, transferimos nuevamente micelio de P. blakesleeanus procedente de cultivos de 24 h en glucosa 2 % (p/v), a medios mínimos conteniendo acetato en diferentes concentraciones que variaron desde 0 (es decir, sin fuente de carbono) hasta 2,73 % (p/v). En la figuras 4 y 5 se representan los datos obtenidos en forma de % residual de glucógeno tanto en escala linear como en escala logarítmica, para una mejor visualización.

Figura 5: Representación en escala logarítmica del efecto de las diferentes concentraciones de acetato sobre la degradación de glucógeno.

Se aprecia claramente en ambas figuras que la velocidad de degradación del glucógeno almacenado es directamente proporcional a la concentración de acetato que tiene el medio al que es transferido el micelio crecido en glucosa.
Tampoco en estos experimento la variación de pH es muy grande (datos no representados) por lo que no debe tener efecto en la degradación de glucógeno.
En la figura 6 se representa la evolución del peso seco a lo largo de este experimento. En este caso, al contrario de lo que sucedía con los otros ácidos monocarboxílicos estudiados anteriormente apenas se observa variación en los niveles de peso seco a lo largo del proceso, e incluso en los niveles más bajos de acetato se produce un ligero incremento de la masa miceliar recogida. Tan solo cuando la concentración de acetato es superior a 1,36 % se observa un descenso claro del peso seco obtenido (datos no representados).

Figura 6. Representación en escala linear de la evolución del peso seco recogido a lo largo del experimento para las diferentes concentraciones de acetato utilizadas.



4. CONCLUSIONES

La presencia en el medio de cultivo de ácidos monocarboxílicos provoca un fuerte estrés que lleva a la degradación rápida del glucógeno almacenado durante el crecimiento en glucosa.

La degradación del glucógeno es dependiente de la concentración de monocarboxilatos en el medio.



5. BIBLIOGRAFÍA

Botz, T. (1985). Untersuchugen zur regulation des stoffwechsels von Phycomyces blakesleeanus am beispiel der gluconeogenese. Ph. D. Thesis, University of Frankfurt..
Cerda-Olmedo, E. y Lipson, E.D. (1987). A biography of Phycomyces. En Phycomyces, 7-26 (Cerdá-Olmedo, E. y Lipson, E.D. eds.), Cold Spring Harbor, New York.
Galland, P. y Ootaki, T. (1987). en Phycomyces (eds. E. Cerdá-Olmedo & E. D. Lipson) Cold Spring Harbor, New York.
Gangloff, E. D. (1966). Energy metabolism of Phycomyces blakesleeanus. The citric acid cycle and associated aminoacids. Can. J. Microbiol. 12, 1-9.
Ingold, C.T. (1940). Note on spore liberation in the Mucoraceae. New Phytol. 39, 423-425.
Rúa J., Busto F., deArriaga D., y Soler J. (1993) Glycogen in Phycomyces blakes-leeanus: influence of growth conditions and nutrient limitation. J. Gen. Microbiol. 139, 217-222.
Rudolph, H. y Ochsen B. (1969). Turnover of trehalose in heat-activated spores of Phycomyces blakesleeanus. VI. Contribution to the causal analysis of heat activation of fungal spores. Arch. Mikrobio.l 65, 163-171.
Sandmann, G. (1977). Der einflus des lichtes auf die CO2-aufnahme and deren Folgereaktionen bei Phycomyces blakesleeanus Bgff. Ph. D. Thesis, University of Frankfurt.
Sandmann, G. y Hilgenberg W. (1980). The light-dependent intermediary metabolism of Phycomyces blakesleeanus Bgff. II. Formation and degradation of oxaloacetic acid. Z. Pflanzenphysiol. 96, 203-210.
Tu J.C. y Malhotra S.K. (1977). The significance of cAMP induced alterations in the cellular structure of Phycomyces. Can. J. Microbiol. 23, 378-388.
Van Laere, A. J., Furch, B. y van Assche, J. A. (1987) en Phycomyces (eds. E. Cerdá-Olmedo & E. D. Lipson). Cold Spring Harbor, New York

[walsen]

Así que al cabo de un rato, cuando por fin Laura arrancó el coche, Raúl comenzó a hablar dulcemente con ella, mientras yo trataba de dormir para evitar ser el blanco de la furia de mi novia y, de paso, que aquel triangulito lila dejase de ser el blanco de mis miradas.

[walsen]

De todas maneras, si yo no hubiese bebido tanto aquella noche, tampoco me habría envalentonado para hacer lo que mi mente me pedía hacer. Pero lo hice.

Casi casualmente deje caer mi mano derecha sobre su pierna izquierda. Primero la deje quieta sobre su cálido muslo, como un lagarto descansando al sol, absorbiendo todo el calor corporal que emanaba de entre los poros de aquella suave piel. Pero enseguida comencé a deslizar lentamente la
mano hacia aquel triangulito lila.

[Aioria]

SUBURN TENIA discOs de ALEJANDRO SANZ ORIGINALES y varios, yo les vi

gilipollas

arrggghhhhh:P:P

tranki, smos tolerantes con todos los gustos....

[mameaddict]

Vaya mierda!!!! No se puede poner + de 102400 caracteres en un post... y yo tenía uno preparao con + de 500000.

[Akira88]

HEY DEAD!! LEE ESTO!!

a mi en la pagina 30 despues del post de mameaddict, la parte de abajo donde esta el quick reply se me puso negra y solo se el cuadro blanco para escribir...

A mi tambien

[Sunburn]

La Dirección General de Cooperación y Comunicación Cultural contribuye al favorecimiento de la comunicación cultural entre las Comunidades Autónomas, a mejorar la proyección de la cultura española en el extranjero y, en general, a la promoción de la cultura en todos aquellos ámbitos que no son una función específica de otras Direcciones Generales de la Secretaría de Estado de Cultura.

Algunas de sus funciones son:

Mantener la Agenda Cultural en Internet.
Organizar y desarrollar programas culturales en el extranjero.
Participar en la preparación de Tratados, Convenios y programas de cooperación, tanto a nivel nacional como internacional, con instituciones, entidades y personas públicas o privadas.
Organizar encuentros, seminarios, publicaciones, etc. destinados al fomento del voluntariado y del turismo cultural y a propiciar la implicación de la sociedad en la cultura.
Gestionar los programas de becas de formación y ayudas de la Secretaría de Estado de Cultura.
Cooperar con la acción cultural de las Comunidades Autónomas, propiciando, de acuerdo con ellas, la comunicación cultural entre las mismas, el conocimiento de la pluralidad y riqueza de sus respectivos Patrimonios Culturales, así como el intercambio de información sobre sus actividades culturales.
Canalizar la información sobre las convocatorias de ayudas del "Programa 2000" de la Unión Europea, difundiendo información y prestando asesoramiento a los profesionales, operadores y agentes culturales.

[Sunburn]

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[METHODMAN]

Victoria rotunda del Madrid en Roma (0-3)

Guti, que ha conseguido dos goles, ha sido uno de los destacados de un partido que ha mostrado las carencias del equipo italiano


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Guti y Raúl se abrazan tras uno de los goles logrados por su equipo. ( EFE )

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ELPAÍS.ES | Madrid
El Madrid ha comenzado su defensa del título europeo con una victoria clara ante el Roma por 0-3. Los goles madridistas han sido conseguidos por Guti (2) y Raúl. El equipo de Capello, en el que Guardiola ha disputado la segunda parte, ha defraudado por completo. El conjunto madridista ha vuelto a mostrar que en Europa se mueve con más comodidad que en la competición española.

El partido comenzó como se esperaba, con los italianos atrás, presionando y dando alguna patada para asustar al Madrid. Esto llevó a que no hubiera un dueño claro de la pelota y a un ritmo cortado por constantes faltas.

Así estaban las cosas cuando los italianos dispusieron de dos claras oportunidades, solos ante Casillas, que no aprovecharon, al contrario, demostraron lo mucho que acusaron las bajas de Totti y Batistuta. A esto se añadió la renuncia de Capello a jugar con Guardiola desde el principio, algo que remediaría en el descanso.

La ley del fútbol que asegura que el que no aprovecha sus oportunidades pierde se cumplió poco antes del descanso. Guti recibió un balón en el vértice del área hizo un recorte y disparó con la derecha junto al poste. Un buen gol que vuelve a situar a Guti en primera línea de la delantera madridista.

Raúl resuelve

El equipo italiano mejoró al comienzo de la segunda parte de la mano de Guardiola, aunque siguió sin puntería, mientras el Madrid resolvió sin demasiados problemas los intentos del Roma. El partido entró en su fase decisiva y ahí volvió Raúl a demostrar su eficacia. Una jugada de Guti con varios rebotes llevó el balón fuera del área, el siete madridista no se lo pensó y envió un zurdazo que batió a Antonioli.

Hasta el final el conjunto de Del Bosque jugó a gusto, sin problemas atrás, con toque en el centro y llegando con claridad a la meta italiana. Así hasta que Guti, a diez minutos del final, conseguía en una gran jugada el tercero. Un golazo que llevó a muchos aficionados romanos a abandonar el campo.

El Madrid es líder del grupo, con 3 puntos, ya que en el otro partido el Genk belga y el AEK Atenas han empatado a cero. Su próximo partido lo jugará la semana que viene en el Bernabéu ante los belgas.

[Sunburn]

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